配种的最佳时机应在母獒阴部流血后的12-13天间。这时母獒开始排卵，生殖道已为交配做好了准备，母獒也表现出愿意交配的征兆，如阴门充分肿胀甚至外翻，分泌物的量减少并且由开始时的血样粘液逐渐变成浅色或不见血，如用手按压母獒腰部或扶按尾部，则站立不动，尾巴抬起偏向一侧，阴门频频开闭。遇公獒则频频排尿，表示愿意接近公獒，让公獒嗅其阴部，接受公獒爬跨，有是还爬跨公獒，表现越来越强的性欲。见上面这些征兆后，要尽快让其交配。一定要在母獒交配欲最强，发情征兆最明显时交配。
配种次数以两次为好，即初配和复配。两次相隔距离的时间以24-48小时为宜，以免影响胎儿的发育。交配的地点最好是在母獒生活的地方，不要多人围观，以免在交配过程中收到惊吓，影响交配。交配时以自然方法为主，辅以人工帮助方法。交配时，当插入后几秒钟开始，随后海绵体充分膨胀成栓塞状。这时母獒会扭动身体，试图将公獒从背上摔下，或公獒自动下来，公母獒成对尾姿势。这种栓塞状态持续10-25分钟，有时时间更长，这时公獒的会在母獒内旋转180度，，因此这时不可强行分开，否则会严重损伤生殖器官。当公母獒松脱后，会各自舔阴部，不可马上牵拉，驱赶，尤其是公獒，在交配后常会出现腰部凹陷，俗称“掉腰子”切不可让其剧烈运动。交配后也不可让其马上饮水，应休息片刻，活动一会再让其饮水。交配时间，夏季最好在清晨或傍晚，冬季则以中午交配唯宜。交配前最好不要喂食或不要喂得过饱，以免因食后立即交配而引起呕吐。
