分辨乌龟公母可以通过乌龟的气味、自身体型大小、龟壳、尾巴、腹部龟甲以及排泄孔的形状位置等因素来判断。
乌龟分公母可以从六个方面来看，公龟的气味比母龟浓；公龟一般比同龄的母龟体型小；公龟的壳是黑色的，而母龟的壳是黄色的；公龟尾巴粗长呈三角状，母龟尾巴细短呈条状；公龟的花纹稀疏、腹甲凹陷，母龟腹部的花纹密集、腹甲宽扁；公龟泄殖孔距离尾端较近，母龟距离甲壳较近。
从气味来判断。公乌龟的气味比较浓烈，还会有些臭味；而母龟的异味相对比较淡些。
从体型大小来判断。公乌龟的个头会比母乌龟的体型小一些；而母乌龟的体型相对较大。
从龟壳来判断。公乌龟壳的颜色是黑色，会比较偏深，躯干较长而比较薄；而母乌龟的壳是黄色的，颜色偏浅，身体短而厚。
从尾巴形状来判断。公龟的尾巴细长，根部较为粗大，是呈三角状的；母龟的尾巴比较短又细小，呈条状，尾根离肛门的距离较近。
从腹甲形状来判断。从腹甲外观来判断，公乌龟的腹部龟甲是有些凹陷的形状，这是为了方便繁殖。公乌龟腹甲的2块肛盾形成的缺刻较浅，缺刻角度较大；而母乌龟的腹部龟甲就相对平坦宽扁些。母乌龟腹甲的2块肛盾形成的缺刻较深，缺刻角度较小。
从泄殖孔来判断。观察泄殖孔与尾端距离及形状可以看出，公龟泄殖孔在腹甲外部，孔呈长形；母龟的泄殖孔在腹甲内部，呈圆形。按压乌龟的腹甲时，公龟的生殖器会露在外面，母龟只会流出少量液体。
以上方法适用于较大一点的乌龟的性别判断，而幼小的乌龟较难区分。也有人会用手抓乌龟甲壳，让它四脚悬空，若是尾巴有从下往上勾的动作就是公龟，可以用这种方法进行实践。
